慢病毒液在常溫(一般指25℃左右)下通常無法長時間保存,其活性會隨時間快速下降,具體存活時間受病毒載體類型、環境條件(如濕度、光線、pH值)及實驗條件影響。在多數實驗場景中,慢病毒在37℃液體環境下數小時內會顯著失活,24小時后感染活性基本喪失。
慢病毒液常溫保存的關鍵限制
溫度敏感性
慢病毒作為逆轉錄病毒,其包膜結構對溫度高度敏感。Higashikawa和Chang的研究表明,濃縮病毒在37℃下的半衰期僅為10.4±1.2小時,室溫(約25℃)下可延長至1-2天,但4℃下可保存約一周。常溫環境會加速病毒包膜蛋白變性,導致感染能力下降。
pH值影響
中性環境(pH 7.0)下慢病毒相對穩定,但偏離中性(如pH 6.0或8.0)時,半衰期會縮短至10分鐘以內。常溫下若環境pH波動,病毒活性可能更快喪失。
環境因素疊加效應
濕度、光線(如紫外線)及滲透壓變化會進一步加速病毒失活。例如,將病毒與不同pH的緩沖液混合后暴露于常溫,滲透壓失衡可能導致半衰期顯著縮短。
慢病毒液保存與使用的推薦方案
短期實驗(一周內)
若需短期使用,可將病毒液置于4℃保存,但需避免反復凍融(每次凍融會降低滴度10%-50%)。使用前應輕輕混勻,避免劇烈震蕩。
長期保存(超過一周)
需將病毒液分裝后置于-80℃冰箱,并使用封口膜密封。病毒在-80℃下可保存6個月以上,但超過6個月后建議重新測定滴度。分裝可減少反復凍融次數,保護病毒活性。
運輸與臨時存放
運輸時需采用干冰低溫冷鏈,避免常溫暴露。若需臨時存放,可置于冰浴或4℃環境,但應盡快轉移至-80℃保存。
特殊場景下的穩定性提升方案
凍干保護技術
通過真空冷凍干燥(凍干)技術,可將慢病毒制成粉體,在4℃或23℃下保存更穩定。凍干制劑可耐受5-6次反復凍融,顯著減少活性損失。
專用儲存液
使用如ViralStars慢病毒穩定儲存液等專用保護劑,可提高病毒在-80℃及反復凍融條件下的穩定性,延長保存時間并提升轉導效率。